【資料圖】

如何看流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果中的圖

博凌科為解答：FCM數(shù)據(jù)的存貯的方式是FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排隊(duì)(List Mode)方式。易于加工處理分析，但缺乏直觀性，數(shù)據(jù)的顯示通常有一維直方圖、二維點(diǎn)圖、等高線圖、密度圖等幾種；由數(shù)據(jù)還可以做出標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分 析。Q1：坐標(biāo)軸的意義？1、 單參數(shù)直方圖 每一個(gè)細(xì)胞單參數(shù)的測(cè)量數(shù)據(jù)可以整理成統(tǒng)計(jì)分布，以直方圖的方式來(lái)顯示。在圖中，橫坐標(biāo)表示熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度的值，其單位是道數(shù)（channel），可以是線形（line）或者對(duì)數(shù)（log）。縱坐標(biāo)一般是相對(duì)細(xì)胞/粒子數(shù)（count）！2、 二維圖 在二維圖的中，橫坐標(biāo)/縱坐標(biāo)都表示熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度的值，可以是線形（line）或者對(duì)數(shù)（log）。雙參數(shù)圖可以將樣品細(xì)胞群分開(kāi)，從而方便對(duì)感興趣的細(xì)胞進(jìn)行分析。Q2：Gate和 Regin？ 設(shè)門(mén)是流式細(xì)胞分析中一種重要的技術(shù)，只有通過(guò)最佳的設(shè)門(mén)方式，才能準(zhǔn)確地獲取和分析數(shù)據(jù)，從而得到臨床診斷和科研中有價(jià)值的信息。 On-line gating(threshold gating)監(jiān)測(cè)/獲取數(shù)據(jù) Off-line gating： 分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 散射光設(shè)門(mén)/熒光設(shè)門(mén) 散射光/熒光聯(lián)合設(shè)門(mén) 多重邏輯門(mén)(組合門(mén)) 多重邏輯門(mén) G3=R1 and R2 (G3=R1R2) 其它： G=R1 or R2 G=R1 not R2 Q3:流式圖中的顏色與熒光顏色? 流式圖中的顏色為區(qū)分不同細(xì)胞群而人為指定, 與熒光顏色無(wú)關(guān)!! Q4：流式圖中的陰/陽(yáng)（N/P）如何劃分? 如何做M1陰性界限？實(shí)際上，這個(gè)M1的劃分完全是根據(jù)陰性(同型)對(duì)照來(lái)的！如下圖：左圖為同型對(duì)照，即：您所檢測(cè)的物質(zhì)在陰性組中的基礎(chǔ)表達(dá)量，可以理解為背景、靜息狀態(tài)下、基礎(chǔ)水平、未受刺激時(shí)等。右圖即陽(yáng)性組，也就是接受刺激后，功能狀態(tài)下、藥物作用后等。 Q5: 這么巧，陰性正好在101劃分？？ 其實(shí), 我們可以人為地將電壓，放大倍數(shù)調(diào)到相應(yīng)的大小，使陰性的右邊界在某一個(gè)值上，（通常劃在101附近）這樣后期做sample時(shí)好看！當(dāng)然也可以調(diào)到102，103次方。 Q6：為什么要進(jìn)行熒光補(bǔ)償？ 流式細(xì)胞分析中經(jīng)常要用到2種以上的熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行染色，而目前所使用的多種熒光染料發(fā)射譜間有一定重疊。 熒光補(bǔ)償這個(gè)術(shù)語(yǔ)是指修正熒光滲漏的過(guò)程，如從探測(cè)器除去除匹配熒光以外的任何熒光信號(hào)。

bd流式細(xì)胞儀ros結(jié)果分析怎么看

你是做的熒光染色看ROS水平吧。說(shuō)的具體一些。一般就是熒光強(qiáng)度越高，代表ROS的水平越高。看你用的哪種染料了。

流式細(xì)胞技術(shù)免疫熒光結(jié)果怎么判讀

做單個(gè)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)，或者單細(xì)胞多因子測(cè)定的實(shí)驗(yàn)還是FLOW方便，比如細(xì)胞周期蛋白表達(dá)和細(xì)胞周期的關(guān)系，免疫細(xì)胞PHENOTYPING，BCL-2在凋亡細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)等等。WB只能看一個(gè)細(xì)胞群體的蛋白表達(dá)量，因此精細(xì)度難以和FLOW相比。FLOW的缺點(diǎn)是儀器比較貴，而且要專(zhuān)門(mén)的技術(shù)人員來(lái)操作。

流式細(xì)胞儀分析shrna效率結(jié)果怎么看

shRNA的效果一般是測(cè)目標(biāo)基因的表達(dá)量。1. 先用iso-type control，也就是非特異性的同型抗體染的細(xì)胞測(cè)，設(shè)好了陰性的閾值。2. 再用特異性抗體測(cè)用對(duì)照序列shRNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，看陽(yáng)性細(xì)胞的比率3. 再測(cè)用shRNA轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞，看陽(yáng)性細(xì)胞的比率。4. 最后對(duì)比2和3的陽(yáng)性細(xì)胞的比率有無(wú)變化。如果有明顯減低，說(shuō)明shRNA有效。變化的百分率就是shRNA的效率5. 如果陽(yáng)性比例沒(méi)有明顯變化，但是細(xì)胞的熒光強(qiáng)度有偏移，就比較陽(yáng)性細(xì)胞熒光強(qiáng)度的median，或者mean

如何看待流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果：早期凋亡較多，晚

你是要問(wèn)早期凋亡多，晚期少嗎？首先你要明白你的樣本是怎么準(zhǔn)備的？你說(shuō)的這個(gè)所謂早晚期凋亡，我猜是用了Annexin V +PI 染色吧。這種方法最適用的是懸浮細(xì)胞，而貼壁細(xì)胞采用這個(gè)方法。在搜集樣本的時(shí)候，會(huì)導(dǎo)致大量的人為細(xì)胞膜損傷。結(jié)果就是Annexin V 的陽(yáng)性率增高，看起來(lái)就是早期比例增高了。我見(jiàn)過(guò)最極端的例子就是有人的健康對(duì)照組，結(jié)果是100%陽(yáng)性的。建議你采用其他的方法測(cè)貼壁細(xì)胞的凋亡，就算是用流式，也可以用其他的方法。比如測(cè)caspase底物降解活性等等。